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protocol 分享|过表达细胞株的构建


2023-07-28
过表达细胞株的构建指的是通过生物、化学、物理等细胞转染手段将某个特定基因的表达水平保持稳定的提高,从而实现在该细胞系中特定基因或蛋白功能增强。基因过表达作为一种传统的分子生物学技术,被认为是研究基因功能的实验策略之一,至今依然在生物学研究中发挥着重要作用。

原理

过表达稳定细胞系(Overexpression Stable Cell Lines)的构建利用慢病毒转染、电转等技术手段将特定的基因序列整合到宿主细胞的染色体上,使得目的基因能够在宿主细胞内长期且稳定的表达。

用途

基因功能研究 、免疫/杀伤/增殖等 、抗体药物的活性筛选(细胞水平的结合和阻断)、CAR 分子的杀伤活性评价。

材料与仪器

(以慢病毒 pMSCV 载体为例)包含目的基因和 eGFP-Tag 的 pMSCV 质粒、带有 eGFP-Tag 的 pMSCV 空载质粒、GAG 质粒、VSV 质粒、Puromycin、Polybrene 、Lipo3000、HEK293T 细胞、opti-MEM、DMEM、FBS、双抗、0.45 μm 的滤膜、荧光显微镜等。

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