大鼠耳软骨细胞细胞分离培养

【简介】

软骨细胞位于软骨组织的表层，单个分布，体积较小，呈椭圆形，长轴与软骨表面平行，越向深层的软骨细胞体积之间增大呈圆形，细胞核圆形或卵圆形，染色浅，细胞质弱嗜碱性，常见数量不一的脂滴。

【材料】

手术剪、手术镊、75%酒精、PBS、双抗、FBS、培养皿、15ml离心管、II型胶原酶、胰蛋白酶。

【方法】

1）将耳软骨收集在PBS中反复清洗，剪成lmm×1mm×1mm左右的组织块 ，转入无菌离心管中。

2）加入0.25%胰蛋白酶消化30min反复洗涤、离心。

3）加入2mg/mlII型胶原酶溶液置于37℃水浴中轻微振荡消化 ，直至软骨组织块基本消失、溶液变混浊为止，一般需 6～8h。

4）剩下未消化的组织用1mg/mlII型胶原酶37℃震荡消化过液，一般需要16～18个小时。

【培养】

软骨细胞专用培养液：DMEM/F12活性成分：1%ITS、20ng/mL肝细胞生长因子(HGF)、5-10％胎牛血清(FBS)、40μg/mL维生素C(L-抗坏血酸)。

【鉴定】

1）免疫荧光鉴定

II型胶原蛋白抗体（Collagen II）。